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高压匀浆机厂家分析组织匀浆的制备

发布时间:2017-09-04   点击次数:630次
  高压匀浆机厂家讲解组织匀浆的制备:
  1、取组织块(0.2g~1g)zui少可到2~5mg,在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤纸拭干,称重,放入5或10ml的小烧杯内。
  2、用移液管量取预冷的匀浆介质或者用0.86%冷生理盐水,匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍,用移液管或移液器取总量的2/3的匀浆介质或生理盐水于烧杯中,用眼科小剪尽快剪碎组织块。
  3、匀浆的方式有多种:手工匀浆、机器匀浆、超声匀浆、反复冻融。
  手工匀浆:将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块,一起倒入匀浆管中进行匀浆,左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8分钟),充分研碎,使组织匀浆化;
  机器匀浆:用高压匀浆机上下研磨制成10%组织匀浆,也可用内切式匀浆机制备(匀浆时间10秒/次,间隙30秒,连续3~5次,在冰水中进行),皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间;
  超声粉碎:用超声粉碎机进行粉碎,用超声波发生器使细胞破碎,也可用超声波发生仪,5秒/次,间隙10秒反复3~5次;
  反复冻融:培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆,也可以反复冻溶3次左右,但有部分酶活力会受影响。取少量组织匀浆做涂片(直接涂片、染色均可),显微镜下观察细胞是否磨破,若没有破则可以延长匀浆时间或增加冻融次数。
  4、将制备好的10%匀浆用普通离心机或低温低速离心机离心10~15分钟,若检测ATP酶,则只需要1000转/分,离心5分钟,将离心好的匀浆留下上清弃下面沉淀。根据实验需要,取适量上清夜进行各种测定。
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