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高压细胞破碎仪厂家述细胞破碎的实验室方法

发布时间:2017-10-18   点击次数:896次
  高压细胞破碎仪厂家讲述随着重组DNA技术得到广泛应用以来,生物技术发生了质的飞跃。很多基固工程产物都是胞内物质,必须将细胞破壁。使产物得以释放。才能进一步提取,因此细胞破碎是提取胞内产物的关键步骤。破碎方法的得当与否,直接影响到所提取产品的产量、质量和生产成本。
  细胞破碎的实验室方法可通过酶解法来实现,高压细胞破碎仪厂家与您一起来探讨:
  酶解法利用不同水解酶,如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶和酯酶等,于37℃,pH8,处理15分钟,可以专一性地将细胞壁分解,释放出细胞内含物,此法适用于多种微生物。例如从某些细菌细胞提取质粒DNA时,可采用溶菌酶(来自蛋清)破细胞壁,而在破酵母细胞时,常采用蜗牛酶(来自蜗牛),将酵母细胞悬于0.1mmol/L柠檬酸一磷酸氢二钠缓冲液(pH=5.4)中,加1%蜗牛酶,在30℃处理30分钟,即可使大部分细胞壁破裂,如同时加入0.2%疏基乙醇效果会更好。此法可以与研磨法联合使用。
  细胞培养和收集:将活化酵母菌株接入马铃薯培养基中,于30℃摇床培养。在对数生长期离心收集细胞,制成湿菌体。
  细胞的破碎:
  1.取5ml菌液悬液于10ml的1号试管中,再取1%的蜗牛酶于2号试管中。再取0.2%的疏基乙醇于3号试管中。
  2.将三支都放入30℃的水浴中,预热30s后,将装有蜗牛酶的2号试管和装有疏基乙醇的3号试管均倒入盛有菌液的试管中,在水浴中处理30分钟。
  3.取一滴菌液镜检。取5个视野数出破碎细胞的个数并算出平均值。对比各种方法的破碎细胞数量。
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