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高压匀浆机厂家浅述实验室匀浆的制备步骤

发布时间:2017-11-06   点击次数:879次
  高压匀浆机广泛应用于科研,医疗,化工制药,食品工业等领域,物料在匀浆杯中通过电机旋转驱动旋刀同时进行劈裂,碾碎,掺和等过程,是物料搅拌捣碎的过程。
  高压匀浆机选用微型电机,电机驱动旋刀在瓶杯内作用,利用瓶内流体力学和高速机械剪切力做工。有大小六种瓶、刀、刀轴,并附有六个控温杯,可根据物料的需要在杯内放入热水或冷却液进行调温,并设有机械定位,整个机件作业自如方便,电器部分设有开关,通电指示灯、调速器可根据需要转速进行无级调速,外壳设有接地装置使用时安全可靠。
  高压匀浆机厂家为您讲解组织匀浆的制备步骤:
  1.取组织块(0.2g~1g)zui少可到2~5mg,在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤纸拭干,称重,放入5或10ml的小烧杯内。
  2.用移液管量取预冷的匀浆介质或者用0.86%冷生理盐水,匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍,用移液管或移液器取总量的2/3的匀浆介质或生理盐水于烧杯中,用小剪尽快剪碎组织块。
  3.匀浆的方式有多种:手工匀浆、机器匀浆、超声匀浆、反复冻融。
  手工匀浆:将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块,一起倒入匀浆管中进行匀浆,左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8分钟),充分研碎,使组织匀浆化。
  机器匀浆:用组织研磨机6m/s研磨制成10%组织匀浆,也可用高压匀浆机制备匀浆时间20秒/次,间隙10秒,连续3-5次。
  超声粉碎:用超声波细胞破碎仪进行破碎,可用以振幅12.7mm超声处理30秒使细胞破碎。
  反复冻融:培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆,也可以反复冻溶3次左右,但有部分酶活力会受影响。
  取少量组织匀浆做涂片(直接涂片、染色均可),显微镜下观察细胞是否磨破,若没有破则可以延长匀浆时间或增加冻融次数。
  4.将制备好的10%匀浆用普通离心机或低温低速离心机3000r/min左右离心10~15分钟,若检测ATP酶,则只需要1000转/分,离心5分钟,将离心好的匀浆留下上清弃下面沉淀。
  根据实验需要,取适量上清液进行各种测定。
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